標題摘要內容
 circRNA服務

circRNA服務?
circRNA RIP實驗
來源: | 作者:geneseed | 發布時間: 2017-09-03 | 13314 次瀏覽 | 分享到:

  RNA的功能已經超出作為遺傳信息傳遞中介的作用,很多類型的RNA分子直接可以發揮功能,RNA發揮功能的過程中,與靶分子的結合是關鍵的一步,分析,鑒定到真實的RNA與蛋白質的相互作用是探索RNA功能的關鍵。
        RIP實驗是基于蛋白研究RNA-蛋白相互作用的技術,該技術是全基因組水平的檢測技術,適合體內研究。


 

實驗流程:

1.細胞裂解
2.捕獲RNA-蛋白復合物
3.洗脫
4.檢測


實驗實例:

Hela細胞裂解產物為樣本,以anti-SNRNP70為目的抗體,以正常兔IgG為陰性抗體,進行免疫沉淀。

免疫沉淀所得蛋白質樣品,進行Western blot檢測,Input樣本與目的樣本在約70KDa大小位置有明顯條帶,陰性對照樣本無條帶。
免疫沉淀所得RNA樣品為模板,以U1 snRNA特異RIP引物,進行RT-PCR分析,input樣本與目的樣本可見明顯的PCR產物,指示SNRNP70富集U1 snRNA。而陰性對照與空白對照PCR產物較弱,指示正常兔IgG與磁珠對U1 snRNA的非特異富集較少。

Western blot檢測:

 

RNA 檢測:

 

 

電泳跑膠圖:

 


 

PCR檢測結果